發酵罐滅菌之后，就可以用來培養細菌了。

1.發酵罐接上(shang)pH電極的插頭(tou), 接通底部冷(leng)卻水(shui)管和(he)空氣出口處的冷(leng)凝(ning)器上(shang)的冷(leng)卻水(shui)管, 將各硅酮(tong)管置于相(xiang)應的蠕動泵(beng)上(shang)。

2.把(ba)攪拌馬達置于攪抖聯動裝置上(shang)。

3.把(ba)光標調到“Temperature”檔,設定一個合適的溫度。

4.校正溶氧電極的滿(man)刻度。

1)利用光標(biao)將攪拌速(su)度調(diao)至 大(da)轉速(su)，一般為800 r/min,把通(tong)氣量調(diao)節到(dao)1.0 L Air/L medium/min(1VVM)。

2)調到(dao)calibration界面，光標調至(zhi)溶氧處，“span”檔,設定讀數為(wei)100，反復調節幾次，直(zhi)至(zhi)穩(wen)定至(zhi)100，轉至(zhi)menu界面。

5.其他參數(shu)設(she)定(ding)(ding)。把光標調到Agit檔，設(she)定(ding)(ding) 小值(zhi)為(wei)200 r/min。把光標調到DO檔,設(she)定(ding)(ding)參數(shu)為(wei)合適的(de)值(zhi), 調整(zheng)為(wei)與溶氧(yang)偶聯檢(jian)(jian)測。把光標調到Agit檔，設(she)定(ding)(ding) 大值(zhi)為(wei)800 r/min;把光標調到pH檔,設(she)定(ding)(ding)參數(shu)為(wei)7.0，調整(zheng)為(wei)自動檢(jian)(jian)測;接上酸(堿)瓶，并打開自動檢(jian)(jian)測系統。

6.接(jie)種(zhong)：發(fa)酵(jiao)(jiao)罐的(de)接(jie)種(zhong)就是(shi)將(jiang)蘸滿乙(yi)醇的(de)棉(mian)花球纏在(zai)(zai)接(jie)種(zhong)口外套(tao)上, 點燃(ran)火焰(yan)以(yi)前將(jiang)接(jie)種(zhong)口的(de)蓋子(zi)旋松。然后(hou)點燃(ran)發(fa)酵(jiao)(jiao)罐上的(de)棉(mian)花球, 取掉蓋子(zi), 立即(ji)在(zai)(zai)火焰(yan)中加入各(ge)組分培養基(ji)和種(zhong)子(zi)液。 后(hou)將(jiang)蓋子(zi)浸泡在(zai)(zai)乙(yi)醇中, 接(jie)種(zhong)后(hou), 用攝子(zi)將(jiang)蓋子(zi)準確放回原位, 旋緊。

7.打開記錄實驗過程的專用軟件(jian)。

8.發酵過程中，每隔兩小時記錄溶(rong)氧、轉速、測定OD600，取樣(yang)品5 mL儲存進行(xing)各種分析檢測。

認真的(de)對(dui)照上面(mian)的(de)步(bu)奏進(jin)行(xing)，發酵缸的(de)操(cao)作就順利完成了。