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細菌發酵罐的(de)取(qu)樣(yang)與檢測(ce)是監控發酵過程(cheng)、確保產品(pin)質(zhi)量(liang)的(de)重要環節,以下是常(chang)見(jian)的(de)方法:
取樣方法
取(qu)樣(yang)時(shi)(shi)機(ji):根據發酵工藝和監測(ce)需求(qiu)確(que)定取(qu)樣(yang)時(shi)(shi)間點,一般在發酵前期、中期和后期分別取(qu)樣(yang),以了解細菌生(sheng)長(chang)和代謝的(de)不同階段(duan)情(qing)況(kuang)。如在對數生(sheng)長(chang)期,可(ke)更頻(pin)繁地取(qu)樣(yang)監測(ce)生(sheng)長(chang)速(su)率。
取(qu)(qu)樣(yang)(yang)工(gong)具:使用無(wu)菌(jun)(jun)的(de)取(qu)(qu)樣(yang)(yang)器具,如無(wu)菌(jun)(jun)注射(she)器、取(qu)(qu)樣(yang)(yang)管等。對于(yu)大型發酵罐,可(ke)能(neng)需要(yao)專(zhuan)門設計的(de)取(qu)(qu)樣(yang)(yang)裝(zhuang)置(zhi),確保取(qu)(qu)樣(yang)(yang)過程中不引入雜菌(jun)(jun)且能(neng)代表發酵罐內的(de)整(zheng)體(ti)情況。
取(qu)(qu)(qu)(qu)樣(yang)(yang)操(cao)作:取(qu)(qu)(qu)(qu)樣(yang)(yang)前,對發酵罐取(qu)(qu)(qu)(qu)樣(yang)(yang)口進行(xing)嚴格的消毒處(chu)理,可用(yong)酒精(jing)棉(mian)球擦拭或用(yong)蒸汽滅菌(jun)。然后,按(an)照無(wu)菌(jun)操(cao)作要(yao)求,將(jiang)取(qu)(qu)(qu)(qu)樣(yang)(yang)器(qi)具插入取(qu)(qu)(qu)(qu)樣(yang)(yang)口,抽(chou)取(qu)(qu)(qu)(qu)適量的發酵液樣(yang)(yang)品。取(qu)(qu)(qu)(qu)樣(yang)(yang)后,立即將(jiang)樣(yang)(yang)品轉移至(zhi)無(wu)菌(jun)容器(qi)中,并密封(feng)好,防(fang)止外界微(wei)生物污(wu)染。
檢測方法
微生物檢測
細胞(bao)計(ji)(ji)數(shu)(shu):采用顯(xian)微(wei)鏡直接(jie)計(ji)(ji)數(shu)(shu)法或平板菌(jun)落(luo)計(ji)(ji)數(shu)(shu)法。顯(xian)微(wei)鏡直接(jie)計(ji)(ji)數(shu)(shu)可(ke)快(kuai)速得(de)到細菌(jun)的總數(shu)(shu)量,但無法區(qu)分活(huo)菌(jun)和死菌(jun);平板菌(jun)落(luo)計(ji)(ji)數(shu)(shu)則是將(jiang)樣品稀釋后涂(tu)布在(zai)固體培養基上,培養后計(ji)(ji)數(shu)(shu)菌(jun)落(luo)數(shu)(shu),能準確反映(ying)活(huo)菌(jun)數(shu)(shu)量。
形(xing)態(tai)觀察(cha):通過(guo)革蘭(lan)氏染(ran)(ran)色(se)(se)等方法對細(xi)菌進行染(ran)(ran)色(se)(se),然(ran)后在顯微鏡下觀察(cha)其(qi)形(xing)態(tai)、大(da)小、排(pai)列方式及染(ran)(ran)色(se)(se)特性等,初步判斷細(xi)菌的(de)種類和生長狀態(tai)。
生理生化(hua)鑒(jian)定:進行一系列生理生化(hua)試(shi)驗,如糖發酵試(shi)驗、氧化(hua)酶試(shi)驗、過氧化(hua)氫(qing)酶試(shi)驗等,根據細菌對(dui)不(bu)同底物的(de)利用情況和(he)酶活性特征,進一步鑒(jian)定細菌種(zhong)類(lei)。
理化指標檢測
pH 值(zhi)測(ce)定(ding):使用 pH 電極或(huo) pH 試(shi)紙測(ce)定(ding)發酵液的(de) pH 值(zhi),了解發酵過程中酸堿度(du)的(de)變化,pH 值(zhi)的(de)異(yi)常波動(dong)可能影(ying)響細菌的(de)生長和代謝產物的(de)合成。
溶(rong)氧(yang)(yang)測(ce)定(ding):利用溶(rong)氧(yang)(yang)電極(ji)測(ce)定(ding)發酵液(ye)中的溶(rong)解(jie)氧(yang)(yang)濃度,溶(rong)氧(yang)(yang)是影響好(hao)氧(yang)(yang)細菌生長和(he)代謝的重要(yao)因(yin)素,通(tong)過監測(ce)溶(rong)氧(yang)(yang)可(ke)優(you)化通(tong)氣和(he)攪(jiao)拌條件。
產(chan)物(wu)(wu)濃度測(ce)定:根據發酵產(chan)物(wu)(wu)的不同,采用(yong)相應的檢測(ce)方法(fa),如(ru)高效液相色譜法(fa)(HPLC)、氣相色譜法(fa)(GC)、分(fen)光(guang)光(guang)度法(fa)等,測(ce)定目標產(chan)物(wu)(wu)的濃度,以(yi)評(ping)估發酵過(guo)程的效率和產(chan)物(wu)(wu)的產(chan)量。
此外,還可以通過檢測(ce)發酵液(ye)的(de)(de)黏(nian)度、電(dian)導(dao)率(lv)等參數,間接(jie)了(le)解發酵過程(cheng)中細菌(jun)的(de)(de)生長(chang)和代謝情(qing)況。同(tong)時,為保證檢測(ce)結果的(de)(de)準確性(xing)和可靠性(xing),需定期對檢測(ce)儀器進(jin)(jin)行校準和維護,并(bing)嚴(yan)格按照操(cao)作規程(cheng)進(jin)(jin)行檢測(ce)。